Lunes
11/12/2017
Detección de virus ISA mediante PCR y Sondas Taíman
El virus de la Anemia Infecciosa del Salmón (ISAV) causa una alta mortalidad en salmones. Su signología clínica incluye una severa anemia, exoftalmia y hemorragia petequial y hepática entre otras.
16/03/2010


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Detección de virus ISA mediante PCR y Sondas Taíman

 Los métodos de diagnóstico actualmente utilizados comprenden un test de inmunofluorescencia indirecta (IFAT), Reacción en Cadena de la Polimerasa acoplado a Transcripción Reversa (RT-PCR), y aislamiento y neutralización del virus. Sin embargo, estos métodos presentan diversas limitaciones: algunas cepas de ISAV no crecen o no producen efectos citopáticos en algunas lineas celulares, por lo que el IFAT no siempre funcionaría en todos los aislados. Además, aunque el RT-PCR es considerado un método más sensible para determinar la presencia de ISAV, ninguno de sus formatos permite que los resultados sean expresados en forma cuantitativa.

 

En el año 2006, Frederick Kibenge, del Departamento de Patología y Microbiología de la Prince Edgard Island en Canadá, desarrolló un método basado en PCR en tiempo rea,l para la detección cuantitativa de ISAV. En este trabajo se describe la utilización del sistema LightCycler de Roche y el uso de sondas Taqman.

 

Sondas Taqman

 

Una de los formas de detectar el DNA que se va formando como consecuencia de la PCR es la adición de un fluróforo. Las sondas Taqman, desarrolladas por Roche y Applied Biosystems, son oligonucleótidos que tienen en uno de sus extremos un fluróforo, generalmente FAM, y en el otro extremo un quencher o apagador. Este último evita que el fluoróforo emita luz detectable mientras la sonda está en solución. Una vez que la sonda se une específicamente al gen blanco, la Taq Polimerasa separa el quencher del fluoróforo y así este último puede emitir luz.

 

Este formato es ampliamente utilizado en diagnóstico molecular, existiendo, a la fecha, kits para detectar bacterias, virus e incluso mutaciones puntuales. Esto porque además esta tecnología permite la detección simultánea de más de un patógeno o gen a la vez. En este sentido, el Laboratorio Biovac ya tiene implementado un ensayo para detectar simultáneamente una porción de un gen del segmento 5, 7 y 8 del genoma de virus ISAv. Esto debido a que cada una de las sondas, específicas para cada gen, está marcada con un fluoróforo que emite a longitudes de onda distintas.

 

En resumen, las sondas taqman son una herramienta altamente específica en la detección de genes mediante PCR en Tiempo Real. Esta es, sin duda, su fortaleza, lo que sumado a un bajo costo permite obtener una detección con un costo/beneficio altísimo.

 

Si desea mayor información no dude en contactarnos al fono 56-2-4413282 o al mailchile.qpcr@roche.com.

 



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